بررسی مولکولی و بهینه سازی تولید آنزیم آلکالین پروتئاز در ایزوله های باسیلوس

پروتئازها یکی از مهمترین آنزیم های صنعتی هستند. پروتئازها دارای کاربردهای زیادی در صنایع گوناگونی همچون صنایع غذایی، شوینده ها، داروسازی، چرم و غیره می باشند. این آنزیم ها معمولاً برای مصارف صنعتی به وسیله ی باکتری هایی که متعلق به جنس باسیلوس هستند تولید می شوند. در این مطالعه، پروتئاز قلیایی تولید شده توسط سویه ی rz1 باسیلوس از چشمه های سبلان جداسازی شده بود. آنزیم در محدوده ی ph از 7 تا 12 فعال بود و بهترین فعالیت را در ph برابر با 9 داشت، اگرچه یک پیک کوچکی نیز در ph برابر با 4 مشاهده شد که این حضور 2 نوع پروتئاز را پیشنهاد می کرد. آنزیم در محدوده ی دمایی 20 تا 90 درجه ی سانتی گراد فعال بود و در 60 درجه ی سانتی گراد بیشترین فعالیت را داشت. پروتئاز بطور ویژه ای در حضور zn+2،ba+2،cu+2 وco+2 مهار شده درحالی که بطور نسبی توسط fe+2 وna+2 مهار می شد. همچنین mn+2، mg+2 وca+2 فعالیت آنزیم را تقویت می کردند. بررسی پروفایل پروتئین های ترشحی در سطح sds-page نشانگر تعداد بسیار زیادی باند پروتئینی بود. بررسی اثر مهارکننده ها در غلظت 5 میلی مولار نشان داد که edta قادر به مهارکردن پروتئاز بود درحالی که pmsf مهار نسبی ای داشت. این نتایج نشان داد که پروتئاز مورد مطالعه یک متالو آنزیم است. برخی برهم کنش ها سبب کاهش فعالیت آن می شود که به نظر می رسد یک ریشه ی سرین در جایگاه فعالش دارد.km و فعالیت ویژه ی آن بر روی کازئین محلول به ترتیب mg/ml 625/1 و u/mg 082/11443 بود. این آنزیم دارای خصوصیات بیوشیمیایی خوبی همچون پایداری در دماها و ph های بالا بود.